Karyogramme
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Karyogramme |
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(c)1998 Hans-Dieter
Mallig
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Gewinnung der Zellen: Menschliche Chromosomen kann man z.B. aus
den weißen Blutkörperchen gewinnen, entsprechend präparieren
und übersichtlich darstellen. Hierzu brauchen wir natürlich Blut.
Das können wir erhalten, indem wir eine Fingerkuppe, nachdem wir sie
mit einem Alkoholtupfer gereinigt haben, mit einer sterilen Hämostylette
anstechen. Der austretende Blutstropfen wird mit einer Pipette aufgesaugt.
Die Spitze der Pipette sollte man zuvor in eine Heparinlösung tauchen,
da das Heparin die Calciumionen aus dem Blut bindet und so die Gerinnung
des Blutes verhindert.
Ansetzen der Gewebekultur: Das isolierte Blut wird unter sterilen
Bedingungen in etwa 5 ml Kulturmedium in ein Zentrifugenglas gebracht.
Das Kulturmedium enthält Salze, Glucose, Aminosäuren, Nukleotide,
fetales Kälberserum, Heparin zur Verhinderung von Gerinnung, Antibiotika
zur Verhinderung von Infektionen und Phythämagglutinin. Diese Kultur
wird für ca. 3 Tage im Brutschrank bei 37°C bebrütet. Unter
dem Einfluß des Phythämagglutinins beginnen die kernhaltigen
Lymphozyten zu quellen und führen Mitosen durch. Die kernlosen Erythrozyten
bleiben unverändert.
Was ist der Sinn vom Bebrüten dieser Zellkultur?
Stoppen der Mitosen: Der Kultur wird Colchicin, das Gift der Herbstzeitlose (Colchicum autumnale), zugesetzt und sie wird weitere 3 Stunden im Wärmeschrank aufbewahrt. Das Colchicin hemmt die Ausbildung des Spindelfaserapparates und folglich häufen sich jetzt Metaphasestadien der sich teilenden Lymphozyten an.
Trennung der Lymphozyten von den roten Blutkörperchen:
Zunächst wird die Kultur 5 Minuten zentrifugiert. Dabei setzen
sich die Blutkörperchen ab. Der Überstand wird anschließend
abgesaugt und verworfen. Jetzt wird eine bestimmte Menge destilliertes
Wasser dazu gegeben, das von den Blutzellen osmotisch aufgenommen wird.
Dabei quellen die Zellen. Die roten Blutkörperchen platzen
Verteilung der Chromosomen: Aus einer feinen Pipette läßt
man Tropfen mit einzelnen weißen Blutkörperchen auf einen Objektträger
mit einem Wasserfilm fallen. Beim Aufprall des Tropfens platzt die Zelle
und die Chromosomen breiten sich nebeneinander aus. Zur Fixierung der ausgebreiteten
Chromosomen wird der Objektträger kurz durch eine Bunsenbrennerflamme
gezogen und getrocknet.
Färben: Etwa 15 Minuten dauert die Färbung in verdünnter
Giemsa-Lösung. Danach wird der Objektträger in zwei weiteren
Küvetten kurz gewässert und anschließend getrocknet. Danach
kann mikroskopiert werden.
| Mikroskopieren
und Fotographieren: Die Chromosomen, die offensichtlich aus einer Zelle
stammen, werden gesucht und bei einer Vergrößerung von ca. 800-fach
mikroskopiert und fotographiert.
Sortieren zu einem Karyogramm: Von dem fotographierten Negativ wird eine Postiv-Vergrößerung im Format von mindestens 13x18 cm hergestellt. Aus dieser Vergrößerung schneidet man die einzelnen Chromosomen aus und sortiert sie nach Größe, Lage des Zentromers und je nach Färbemethode auch nach der Musterung. |
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verändert nach stoch. uni-passau: Metaphasechromosomen sortiert |
Wie viele Chromosomen zählst du insgesamt?
In wieviel Gruppen sind sie sortiert ?
Das nebenstehende Karyogramm ist übrigens nicht, wie oben beschrieben, mit Schere und Kleber sortiert worden, sondern von einem Automaten. Und hier kannst du selbst am Bildschirm
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