Gentechnik

DNA-Sequenzierung nach E. Sanger

Das Verfahren zur Bestimmung der Nukleotid-Sequenz einer DNA oder eines ganzen Genoms bezeichnet man als DNA-Sequenzierung.  Wir betrachten hier das Verfahren nach E. Sanger und beschränken uns dabei zunächst auf die Analyse der Nukleotid-Sequenz von einem DNA-Fragment.  Als Ausgangsmaterial für einen Versuchsansatz benötigt man wenige g identischer Stücke dieser einsträngigen DNA.	Einsträngiges DNA-Fragment g dieser einsträngigen DNA entsprechen vielen Milliarden DNA-Molekülen
Da die DNA-Fragmente als Matrizen für die Synthese der komplimentären Stränge dienen sollen, benötigt man außerdem Primer , DNA-Polymerase und Nukleotide (in ihrer aktiven Form als Nukleotid-Triphosphate).  Was ist ein Primer?	DNA-Fragmente mit Primer
Der Reaktionsansatz wird in vier Portionen aufgeteilt und die zur Synthese des Doppelstranges notwendigen Nukleotide als Desoxyribonukleosid- Triphosphate dGTP, dATP, dTTP und dCTP werden großzügig dazu gegeben.  Was sind Desoxyribonukleosid- Triphosphate?	Auch wichtig! Um die synthetisierte DNA später nachweisen zu können, hat man die Phosphatgruppen in einem der vier Nukleotid-Typen sind mit radioaktivem Phosphor P oder  Schwefel S  markiert.

Außerdem wird in jedes Reaktionsgefäß eine geringe Menge eines Didesoxyribonucleosid-Triphosphates  ddGTP, ddATP, ddTTP oder ddCTP gegeben.
Was sind Didesoxyribonukleosid- Triphosphate?

Wird statt einem normalen Desoxyribonukleosid- Triphosphat zufällig ein  Didesoxyribonucleosid-Triphosphat eingebaut, so bricht die DNA Polymerase das Anlagern von weiteren Nukleotiden an dieser Stelle ab.

Der Reaktionsansatz wird in vier Portionen aufgeteilt:

Die vier Ansätze

G	A	T	C
dGTP + dATP + dTTP + dCTP	dGTP + dATP + dTTP + dCTP	dGTP + dATP + dTTP + dCTP	dGTP + dATP + dTTP + dCTP
ddGTP	ddATP	ddTTP	ddCTP

[zur nächsten Seite]

Weitere Selbstlernmaterialien (Häuschen-anklicken)

Last modified:

[Haftungsausschluss]  [Datenschutz]