	Lückentext zur Gentechnik

© 09-2002 Hans-Dieter Mallig (hdm)

Was sind Sonden und wie arbeitet man mit ihnen?

Mit Gensonden versucht man ganz gezielt bestimmte {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|*Gene} bzw. DNA-Sequenzen zu finden und zu {*lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene}. Dazu benützt man oft einsträngige DNA oder {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|*RNA|denaturiert|Gene}, die zu einem gesuchten Gen oder Genabschnitt {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|*komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene} ist und die radioaktiv markiert wurde, um sie dann auch zu lokalisieren.
Um Bakterienkolonien, die auf Agar-Agar-Platten gewachsen sind, auf einen bestimmten DNA-Abschnitt hin zu untersuchen, müssen die Kolonien aber erst auf eine stabilere {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|*Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene} übertragen werden. (Nylon-Membran aufgelegt, von jeder Kolonie bleiben Bakterien haften, auf frischen Nährboden übertragen, wachsen neue Kolonien in gleicher Position auf der Membran mit Hilfe der Nährstoffe aus dem darunter liegenden Nährboden heran).
Die Nylon-Membran mit den neu gewachsenen Kolonien wird nun {lokalisieren|*erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene}. Dabei werden natürlich die Bakterien abgetötet und ihre DNA {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|*denaturiert|Gene}.
Jetzt kann eine Gensonde, eine radioaktiv markierte einsträngige DNA oder RNA, die zum gesuchten Gen oder einem Gen-Teil komplementär ist, hinzu gegeben werden. Die Gensonde und die komplementäre DNA binden sich über {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |*Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene}. (Hybridisierung zwischen der Bakterien-DNA einzelner Kolonien und der Sonde. Das hier beschriebene Verfahren heißt {lokalisieren|erhitzt|*Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene} ist eine sehr häufig angewendete Methode.) Die restliche Gensonde wird abgespült.
Gibt man einen röntgenempfindlichen {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|ursprünglichen|*Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene} auf die behandelte Membran, so schwärzt er sich über den Kolonien mit radioaktiv markierter Sonde. Bakterien dieser Kolonien kann man auf dem {lokalisieren|erhitzt|Kolonie-Hybridisierung|*ursprünglichen|Film |Wasserstoffbrücken|komplementär|Nylonmembran|RNA|denaturiert|Gene} und unbehandelten Nährboden isolieren und klonen.