Gentechnik

© 2002-2007 Hans-Dieter Mallig  (hdm)
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cDNA-Synthese
Gewinnung der Nukleotidsequenz für ein Polypeptid bei Eukaryoten:

Angenommen, man möchte ein bestimmtes Polypeptid eines Eukaryoten von Bakterien produzieren lassen. Man hat  bereits einen Teil der Erbinformation für dieses Polypeptid mit Hilfe einer Sonde im Genom des Eukaryoten lokalisiert und möchte jetzt dazu die gesamte DNA  ablesen, kopieren oder ausschneiden, um sie über einen Vektor in das Bakterium zu übertragen.
Welche Schwierigkeiten bereitet in einem solchen Fall die DNA des Eukaryoten?

Was müsste man besser unternehmen, um die Nukleotidsequenz für das Polypeptid zu gewinnen?

Sind Enzyme bekannt, die m-RNA in komplementäre DNA übersetzen?
 
Benützt man eine reverse Transcriptase, so entsteht aus der m-RNA ein mRNA/DNA-Komplex. Mit einem Enzymgemisch aus RNAse und DNA-Polymerase kann dann die mRNA entfernt und der zweite DNA-Strang aufgebaut werden. Die entstandenen cDNA-Fragmente werden an den Enden so verändert, dass der Einbau in einen Vektor möglich wird.

 

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