Gewinnung der Nukleotidsequenz für ein Polypeptid bei Eukaryoten:
Angenommen, man möchte ein bestimmtes Polypeptid eines Eukaryoten
von Bakterien produzieren lassen. Man hat bereits einen Teil der
Erbinformation für dieses Polypeptid mit Hilfe einer Sonde im Genom
des Eukaryoten lokalisiert und möchte jetzt dazu die gesamte DNA
ablesen, kopieren oder ausschneiden, um sie über einen Vektor in das
Bakterium zu übertragen.
Welche Schwierigkeiten bereitet in einem solchen Fall die DNA des Eukaryoten?
Was müsste man besser unternehmen, um die Nukleotidsequenz für
das Polypeptid zu gewinnen?
Sind Enzyme bekannt, die m-RNA in komplementäre DNA übersetzen?
Benützt man eine reverse Transcriptase, so entsteht aus der m-RNA
ein mRNA/DNA-Komplex. Mit einem Enzymgemisch aus RNAse und DNA-Polymerase
kann dann die mRNA entfernt und der zweite DNA-Strang aufgebaut werden.
Die entstandenen cDNA-Fragmente werden an den Enden so verändert,
dass der Einbau in einen Vektor möglich wird.
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